本发明涉及一种快速解除裸花紫珠种子休眠的方法，该方法包括以下步骤：步骤1）：将裸花紫珠种子分别用5重量%~20重量%的草木灰水溶液、100~300mg/L的赤霉素（GA
1.一种快速解除裸花紫珠种子休眠的方法，该方法包括以下步骤：步骤1)：将裸花紫珠种子分别用5重量％～20重量％的草木灰水溶液、100～300mg/L的赤霉素水溶液和100～300mg/L的α-萘乙酸水溶液浸渍12～24h，然后用水洗净；以及步骤2)：将所述步骤1)中浸渍后的裸花紫珠种子转入恒温或变温条件的光照培养箱中，在混合30重量％～40重量％椰糠的沙质土壤中进行发芽；还包括在进行所述步骤1)之前，进行果实精选和种子分离的步骤；在所述果实精选的步骤中，从健康、无病虫害的裸花紫珠树上采摘白色果实达到80％以上的果实，然后用6～8目的筛子过筛，不能通过6～8目筛网的果实即为成熟果实；在所述种子分离的步骤中，将精选的成熟果实和过20目筛的石英砂按照重量比1∶1.5～1∶2的比例混匀后，反复搓洗，直至种子从果实中分离出来，然后用水将果皮和果实内含物除去，再过20目筛，将石英砂除去，即得裸花紫珠种子。技术领域
本发明涉及药用植物种子的发芽领域，具体的说，本发明涉及一种快速解除裸花紫珠种子休眠的方法。
背景技术
裸花紫珠（Callecarpaxa0nudifloraxa0Hook.etxa0Arn）为马鞭草科紫珠属植物裸花紫珠的干燥叶片，收载于《中国药典》1977年版。具有止血散瘀，抗菌消炎等功效，是裸花紫珠片、裸花紫珠分散片、裸花紫珠胶囊、裸花紫珠颗粒、裸花紫珠栓等近40余种中成药的重要原料。对作为医药原料的裸花紫珠的巨大需求，导致野生资源破坏严重，采集野生资源已经不能满足生产需要，开展规范化生产是解决药材短缺的有效途径，而种苗繁育是规范化生产的重要组成部分，由于裸花紫珠果实成熟周期较长，种子成熟度不一，加上种子狭小，种皮坚硬等，导致裸花紫珠种苗繁育周期较长，出苗不一致，严重影响了裸花紫珠的规范化栽培。通过对国内外文献和专利的检索，有关裸花紫珠种子发芽和种苗繁殖共检索到2篇文献，黄秋银等（黄秋银,蓝祖栽,潘春柳,黄浩.裸花紫珠种子萌发影响因素研究.安徽农业科学,2009(25):12006-7.）进行裸花紫珠的不同成熟度、不同基质、不同新鲜度的种子发芽试验。结果发现，裸花紫珠在果实显紫色时种子发芽效果最佳，发芽率最高可达73.0%；种子用河沙作萌发基质可以得到较好的发芽效果，发芽率为66.0%；新鲜种子比贮藏种子萌发效果好，发芽率最高达72.8%。聂垚等（聂垚,吴永忠,余宝平,肖军平.裸花紫珠种苗繁育与栽培技术.现代园艺2010(12):23-4.）对裸花紫珠的种苗繁育和大田栽培技术进行了研究，其中种苗繁育包括老枝扦插繁育和嫩枝扦插繁育；大田栽培技术主要包含选择土壤，栽种时间与密度，树形的选择与田间管理以及适时采收。种子萌发实验中依据其处理方法的不同可以分为物理处理和化学处理两类，其中物理处理主要包括机械处理、温度处理、超声处理3种，化学处理可以分为酸处理、碱处理、氧化剂处理、盐类处理、激素处理等5类，依据对种子休眠破除的机制又可分为3类：（1）软化种皮、改善种胚与外界环境间的透水特性等，主要有温度处理、盐酸处理、小苏打处理和双氧水处理4种处理方式；（2）营养处理，主要有草木灰、氯化钙处理、硝酸钾处理、氯化铁处理和硼酸处理4种处理方式；（3）激素处理，主要有生长素处理、细胞分裂素处理和赤霉素处理3重方式。为综合研究裸花紫珠萌发特性的研究，本发明探讨草木灰、生长素处理和赤霉素对裸花紫珠种子萌发特性的研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速解除裸花紫珠种子休眠的方法。为了实现本发明的目的，本发明提供一种快速解除裸花紫珠种子休眠的方法，该方法包括以下步骤：步骤1）：将裸花紫珠种子分别用5重量%~20重量%的草木灰水溶液、100~300mg/L的赤霉素（GA₃）水溶液和100~300mg/L的α-萘乙酸（NAA）水溶液中的一种或多种浸渍12~24h，然后用水洗净；以及步骤2）：使所述步骤1）中浸渍后的裸花紫珠种子进行发芽。优选地，在所述步骤1）中，将裸花紫珠种子用5重量%~20重量%的草木灰水溶液浸渍12~24h。优选地，在所述步骤1）中，将裸花紫珠种子用100~300mg/L的赤霉素（GA₃）水溶液浸渍12~24h。优选地，在所述步骤1）中，将裸花紫珠种子用100~300mg/L的α-萘乙酸（NAA）水溶液浸渍12~24h。优选地，在所述步骤1）中，将裸花紫珠种子分别用5重量%~20重量%的草木灰水溶液浸渍12~24h、用100~300mg/L的赤霉素（GA₃）水溶液浸渍12~24h、和用100~300mg/L的α-萘乙酸（NAA）水溶液浸渍12~24h。此处，在本发明的范围内，术语“分别”不对操作的顺序进行任何限定。例如，将裸花紫珠种子分别用5重量%~20重量%的草木灰水溶液浸渍12~24h、用100~300mg/L的赤霉素（GA₃）水溶液浸渍12~24h、和用100~300mg/L的α-萘乙酸（NAA）水溶液浸渍12~24h，可以首先使用5重量%~20重量%的草木灰水溶液处理，也可以首先使用100~300mg/L的赤霉素（GA₃）水溶液或100~300mg/L的α-萘乙酸（NAA）水溶液处理。如本文中使用的，术语“洗净”是指洗涤至洗脱液中化学处理剂为痕迹量。如本文中使用的，术语“浸渍”是指种子在液面之下的状态。优选地，在所述步骤2）中，将所述步骤1）中浸渍后的裸花紫珠种子转入恒温或变温条件的光照培养箱中，在蛭石、湿沙、滤纸、海绵发芽床或者混合30重量%~40重量%椰糠的沙质土壤中进行发芽。更优选地，将所述步骤1）中浸渍后的裸花紫珠种子转入恒温或变温条件的光照培养箱中，混合30重量%~40重量%椰糠的沙质土壤中进行发芽。优选地，还包括在进行所述步骤1）之前，进行果实精选和种子分离的步骤。更优选地，在所述果实精选的步骤中，从健康、无病虫害的裸花紫珠树上采摘白色果实达到80%以上的果实，然后用6~8目的筛子过筛，不能通过6~8目筛网的果实即为成熟果实。更优选地，在所述种子分离的步骤中，将精选的成熟果实和过20目筛的石英砂按照重量比1:1.5~1:2的比例混匀后，反复搓洗，直至种子从果实中分离出来，然后用水将果皮和果实内含物除去，再过20目筛，将石英砂除去，即得裸花紫珠种子。本发明所述的快速解除裸花紫珠种子体眠的方法，能有效解除阻碍裸花紫珠种子萌发的各种因素，包括种皮所形成的机械障碍，打破裸花紫珠种子体眠，显著提高种子发芽率，发芽率可达95.0%，与传统不经过处理的育苗方式相比，具有缩短育苗周期、种苗整齐一致、操作简单、成本低廉等优点，可广泛用于裸花紫珠药材的种苗繁育及栽培。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。说明：1.下列实施例中所采用的发芽试验（除实施例5外）均为纸床发芽试验法，具体如下：直径为9cm的培养皿内放置滤纸，用水湿透，将多余的水倒掉，以保湿不积水为度，选取100粒裸花紫珠种子均匀放入培养皿内的纸上，再将培养皿盖好后放入微电脑控制光照培养箱（LRH-250-G11；广东省医疗器械厂生产），按照各个试验例所设计的特定温度（恒温或变温）条件进行发芽，整个发芽过程中均进行光照；发芽过程中每天检测1~2次，并适当补足水分，裸花紫珠种子开始发芽后，每天计数1次。发现有腐败的种子应随时拣出，若霉变种子>5%应及时更换培养皿内的滤纸，并将种子用蒸馏水清洗后再放入培养皿内继续令其发芽。2.参照《国际种子检验规程》（1985）,《农作物种子检验规程》（1995）等作为评定种子是否发芽的标准(以长出1cm为发芽)。3.种子发芽率是指发芽试验终期，在规定的日期内发芽的全部种子数占供试种子的百分率。发芽率(%)=规定日期内发芽种子/供试种子粒数×100%。本试验中的发芽日期均为自将发芽纸床放入箱中起的20天。4.本实验试图通过多种方法打破裸花紫珠种子的休眠，但只有草木灰、赤霉素和生长素能打破裸花紫珠种子的休眠，其它方法如盐酸处理、双氧水处理等均不能解除裸花紫珠种子休眠。实验材料本实验所用的裸花紫珠（C.nudiflora）种子为2011年12月份~2012年1月份在海南省儋州、五指山、白沙、海口等市县采收的白色成熟的裸花紫珠果实，用6~8目的筛子过筛，不能通过6~8目筛网的果实备用。将精选的成熟果实和过20目筛的石英砂按照重量比1:2的比例混匀后，反复搓洗，直至种子从果实中分离出来，然后用水将果皮和果实内含物除去，再过20目筛，将石英砂除去，即得裸花紫珠种子，将其作为实验材料。实施例1实验方法将裸花紫珠种子分为两组，一组用0.1%盐酸（即0.1体积%盐酸水溶液）浸渍一定时间，一组空白对照。然后用1重量%次氯酸钠水溶液消毒15分钟，无菌水漂洗5次至pH=7。每个浓度平行四组，每组100粒置于30℃恒温培养箱全光照培养，每日统计发芽率。表10.1%盐酸处理对裸花紫珠种子萌发的影响ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>实验结果如表1所示，当裸花紫珠种子不经0.1%盐酸处理时，在第10天左右即开始萌发，但是萌发率较低，发芽率低于5.0%；当20d左右开始有一个萌发集中期，日平均发芽率可以高达12.0%；在30d达到峰值，有83.0%左右的裸花紫珠种子萌发。当裸花紫珠种子用0.1%盐酸1~30min后，其萌发集中期与不经0.1%盐酸处理的裸花紫珠种子同期，在20d左右，日平均发芽率达12.0%±2.0%；在30d达到峰值，经0.1%盐酸处理的裸花紫珠种子萌发率为81.0%±4.0%，与不经0.1%盐酸处理的种子发芽率无显著差异，所以从本研究得出以下结论：以0.1%盐酸处理裸花紫珠种子，对裸花紫珠种子的萌发时间和发芽率均无显著影响。实施例2实验方法将裸花紫珠种子分为两组，一组用不同浓度（W/W）的双氧水浸渍2h，一组空白对照。然后用1重量%次氯酸钠水溶液消毒15分钟，无菌水漂洗5次至pH=7。每个浓度平行四组，每组100粒置于30℃恒温培养箱全光照培养，每隔5日统计发芽率。表2双氧水处理对裸花紫珠种子萌发的影响ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>实验结果如表2所示，当裸花紫珠种子不经双氧水处理时，在第10天左右即开始萌发，但是萌发率较低，发芽率低于5.0%；当20d左右开始有一个萌发集中期，日平均发芽率可以高达12.0%；在30d达到峰值，有83.0%左右的裸花紫珠种子萌发。当用0.05%~0.3%双氧水2h后，其萌发集中期与不经双氧水处理的裸花紫珠种子同期，在20d左右，日平均发芽率达12.0%±2.0%；在30d达到峰值，经双氧水处理的裸花紫珠种子萌发率为81.0%±3.0%，与不经双氧水处理的种子发芽率无显著差异，所以从本研究得出以下结论：以双氧水处理裸花紫珠种子，对裸花紫珠种子的萌发时间和发芽率均无显著影响。实施例3实验方法将裸花紫珠种子分为两组，一组用不同浓度的草木灰水溶液浸渍24h，一组空白对照。然后用1重量%次氯酸钠水溶液消毒15分钟，无菌水漂洗5次至pH=7。每个浓度平行四组，每组100粒置于30℃恒温培养箱全光照培养，每隔5日统计发芽率。表3草木灰处理对裸花紫珠种子萌发的影响ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>实验结果如表3所示，当裸花紫珠种子不经草木灰水溶液处理时，在第10天左右即开始萌发，但是萌发率较低，发芽率低于5.0%；当20d左右开始有一个萌发集中期，日平均发芽率可以高达12.0%；在30d达到峰值，有93.0%左右的裸花紫珠种子萌发。当用5%~20%草木灰水溶液浸渍24h后，其萌发集中期与不经草木灰水溶液处理的裸花紫珠种子同期，在20d左右，但是其日平均萌发率提高至16.0%±1.0%，并在20d达到峰值，经草木灰水溶液处理的裸花紫珠种子萌发率为95.0%±2.0%，与不经草木灰水溶液处理的种子发芽率有显著差异，所以从本研究得出以下结论：以草木灰水溶液处理裸花紫珠种子，对裸花紫珠种子的萌发时间和发芽率均有显著影响。实施例4实验方法将裸花紫珠种子分为两组，一组用不同浓度的赤霉素水溶液浸渍24h，一组空白对照。然后用1重量%次氯酸钠水溶液消毒15分钟，无菌水漂洗5次至pH=7。每个浓度平行四组，每组100粒置于30℃恒温培养箱全光照培养，每隔5日统计发芽率。表4赤霉素处理对裸花紫珠种子萌发的影响ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>实验结果如表4所示，当裸花紫珠种子不经赤霉素水溶液处理时，在第10天左右即开始萌发，但是萌发率较低，发芽率低于5.0%；当20d左右开始有一个萌发集中期，日平均发芽率可以高达12.0%；在30d达到峰值，有83.0%左右的裸花紫珠种子萌发。当用100~300mg/L赤霉素水溶液24h后，其在5d的时候就开始萌发，在第10d，裸花紫珠种子的萌发率可以达到10%左右，15d为裸花紫珠种子萌发集中期，日平均发芽率达12.0%±2.0%；在20d达到峰值，经赤霉素水溶液处理的裸花紫珠种子萌发率为81.0%±3.0%，所以从本研究得出以下结论：以赤霉素水溶液处理裸花紫珠种子，可以缩短裸花紫珠种子的萌发时间，但对裸花紫珠种子发芽率无显著影响。实施例5实验方法将裸花紫珠种子分为两组，一组用不同浓度的α-萘乙酸（NAA）水溶液浸渍24h，一组空白对照。然后用1重量%次氯酸钠水溶液消毒15分钟，无菌水漂洗5次至pH=7。每个浓度平行四组，每组100粒置于30℃恒温培养箱全光照培养，每隔5日统计发芽率。表5NAA处理对裸花紫珠种子萌发的影响ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>实验结果如表5所示，当裸花紫珠种子不经NAA水溶液处理时，在第10天左右即开始萌发，但是萌发率较低，发芽率低于5.0%；当20d左右开始有一个萌发集中期，日平均发芽率可以高达12.0%；在30d达到峰值，有83.0%左右的裸花紫珠种子萌发。当用100~300mg/Lxa0NAA水溶液处理24h后，其在5d的时候就开始萌发，在第10d，裸花紫珠种子的萌发率可以达到10%左右，15d为裸花紫珠种子萌发集中期，日平均发芽率达12.0%±2.0%；在20d达到峰值，经NAA水溶液处理的裸花紫珠种子萌发率为85.0%±3.0%，所以从本研究得出以下结论：以NAA水溶液处理裸花紫珠种子，不仅可以缩短裸花紫珠种子的萌发时间，在一定程度上还可以提高裸花紫珠种子的发芽率。实施例6实验方法将裸花紫珠种子分为14组，参照表6的试验处理，先将裸花紫珠种子用5重量%~15重量%浓度的草木灰水溶液处理24h，再用100~300mg/L的赤霉素水溶液处理24h，最后用100~300mg/L的α-萘乙酸（NAA）水溶液处理24h，然后用1重量%次氯酸钠水溶液消毒15分钟，无菌水漂洗5次至pH=7。每个浓度平行3组，每组100粒置于30℃恒温培养箱全光照培养，每隔5日统计发芽率。表6“草木灰、赤霉素和NAA”三因素“3414”复合处理裸花紫珠种子ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>表7“草木灰、赤霉素和NAA”三因素复合处理对裸花紫珠发芽率的影响ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>实验结果如表7所示，研究了草木灰、赤霉素和生长素α-萘乙酸（NAA）不同组合对裸花紫珠种子萌发的差异性，结果表明：①裸花紫珠种子萌发与草木灰、赤霉素和α-萘乙酸（NAA）供试水平密切相关，当赤霉素和α-萘乙酸（NAA）用量处于设计的中等水平（B₂C₂）时，增加草木灰用量可以显著提高裸花紫珠的种子发芽率，并缩短休眠时间，裸花紫珠的种子发芽率最高处理为A₃B₂C₂，最高发芽率为96.0%±1.0%；②在草木灰和生长素为中等设计施用量（A₂C₂）时，100mg/L可以显著提高裸花紫珠的种子发芽率，并缩短休眠时间，其在10d就可以达到34.0%±2.0%，其在15d可以达到93.0%±2.0%的发芽率，但是当进一步增加赤霉素浓度时，发芽率有降低的趋势；③当草木灰和赤霉素为中等设计施用量（B₂C₂）时，100mg/Lxa0NAA可以显著提高裸花紫珠种子发芽率，并缩短裸花紫珠种子休眠时间，但是当进一步提高NAA浓度时，其促进作用变得不明显。在草木灰、赤霉素和NAA复合处理中，所有符合处理都显著促进了裸花紫珠种子发芽率，并缩短了裸花紫珠种子发芽时间，其中以A₃B₂C₂、A₂B₁C₂和A₂B₁C₁3个处理的效果最为显著，其可以将裸花紫珠种子发芽率提高至96.0%±1.0%；A₂B₁C₂和A₂B₂C₁2个处理对缩短裸花紫珠种子休眠时间、提高发芽势具有显著效果，其在10d就可以达到34.0%~37.0%的发芽率，在15d可以达到91.0%~93.0%的发芽率。实施例7实验方法将裸花紫珠种子分为4组，第1组，直接将裸花紫珠种子直接播种于混有15重量%~20重量%腐熟的农家肥、30重量%~40重量%椰糠、15重量%~20重量%蛭石或细沙、和30重量%~40重量%黑土的栽培基质中；第2组，用混有20重量%草木灰水溶液、200mg/L赤霉素水溶液和200mg/Lxa0NAA水溶液分别处理24h，然后流水冲洗30min，播种于混有15重量%~20重量%腐熟的农家肥、30重量%~40重量%椰糠、15重量%~20重量%蛭石或细沙、和30重量%~40重量%黑土的栽培基质中；第3组，用混有10重量%草木灰水溶液、100mg/L赤霉素水溶液和200mg/Lxa0NAA水溶液分别处理24h，然后流水冲洗30min，播种于混有15重量%~20重量%腐熟的农家肥、30重量%~40重量%椰糠、15重量%~20重量%蛭石或细沙、和30重量%~40重量%黑土的栽培基质中；第4组，用混有10重量%草木灰水溶液、200mg/L赤霉素水溶液和100mg/Lxa0NAA水溶液分别处理24h，然后流水冲洗30min，播种于混有15重量%~20重量%腐熟的农家肥、30重量%~40重量%椰糠、15重量%~20重量%蛭石或细沙、和30重量%~40重量%黑土的栽培基质中。每个处理平行3组，每组100粒，每隔10日统计发芽率。表8草木灰、赤霉素和NAA复合处理对裸花紫珠发芽率的影响ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>实验结果如表8所示，在栽培处理1中，其在30天左右有裸花紫珠种子萌芽，在70d的时候，种子发芽率可以达到83.0%±3.0%，在其它3种处理中，在播种后的20d，即开始有3.0%~5.0%的裸花紫珠种子开始萌发，在播种后的50d，其发芽率可以达到87.0%~92.0%，播种后的50d，其发芽率达到最高，其可以达到92.0%~94.0%。与不经处理的裸花紫珠种子相比，经过本发明的处理方法，可以提高裸花紫珠种子发芽率9%~13%，缩短种子发芽时间20~30d。